A35R抗體生物活性驗證

在ELISA平臺上利用猴痘病毒A35R抗原C1620、C1621分別檢測MPXV A35R單克隆抗體R383e5、R387c6、R386t7、R384c2、R392a3。其中R383e5、R387c6的EC50分別為7.29 ng/mL、9.86 ng/mL。

圖1. A35R抗體（R383e5）ELISA檢測結(jié)果

圖2. A35R抗體（R387c6）ELISA檢測結(jié)果

A29L抗體生物活性驗證

在ELISA平臺上利用猴痘病毒A29L抗原C1619檢測MPXV A29L單克隆抗體R395a6，EC50為10.54ng/mL。

圖3. A29L抗體（R395a6）ELISA檢測結(jié)果

B6R抗體生物活性驗證

在ELISA平臺上利用猴痘病毒B6R抗原C1622分別檢測MPXV B6R單克隆抗體R401c8，EC50為15.26ng/mL。

圖4. B6R抗體（R401c8）ELISA檢測結(jié)果

A35R抗體膠體金應(yīng)用平臺驗證

利用猴痘病毒A35R抗體制備膠體金試紙條，分別包被A35R抗體R386t7、R387c6、R384c2，標(biāo)記A35R抗體R392a3，對0、0.01、0.1、1、10及100 ng/mL濃度的?A35R抗原C1620進(jìn)行檢測，T線顏色呈明顯梯度變化，3對抗體檢測靈敏度均可達(dá)10 pg/mL。

圖5. 猴痘病毒A35R抗體膠體金檢測結(jié)果

A29L抗體膠體金應(yīng)用平臺驗證

利用猴痘病毒A29L抗體制備膠體金試紙條，分別包被A29L抗體R396t5，標(biāo)記A29L抗體R399e2，對0、0.01、0.1、1、10及100 ng/mL濃度的?A29L抗原C1619進(jìn)行檢測，T線顏色呈明顯梯度變化，抗體檢測靈敏度可達(dá)10 pg/mL。

圖6. 猴痘病毒A29L抗體膠體金檢測結(jié)果

B6R抗體膠體金應(yīng)用平臺驗證

利用猴痘病毒B6R抗體制備膠體金試紙條，分別包被B6R抗體R401c8，標(biāo)記B6R抗體R400e7，對0、0.01、0.1、1、10及100 ng/mL濃度的?B6R抗原C1622進(jìn)行檢測，T線顏色呈明顯梯度變化，抗體對檢測靈敏度均可達(dá)50 pg/mL。

圖7. 猴痘病毒B6R抗體膠體金檢測結(jié)果

M1R抗體膠體金應(yīng)用平臺驗證

利用猴痘病毒M1R抗體制備膠體金試紙條，分別包被M1R抗體R417t6，標(biāo)記M1R抗體R418t3，對0、0.0125、0.05、0.1、1ng/mL濃度的M1R抗原C1624進(jìn)行檢測，T線顏色呈明顯梯度變化，抗體對檢測靈敏度均可達(dá)10pg/mL。

圖8. 猴痘病毒M1R抗體膠體金檢測結(jié)果

猴痘病毒（Monkeypox virus, MPXV）是一種有包膜的雙鏈DNA病毒，屬于正痘病毒屬（Orthopoxvirus genus）。MPXV大小為200×250 nm，呈卵形或磚狀，核心區(qū)外包被脂蛋白雙層膜，膜表面布滿隨機(jī)排列的管狀元件（STE）。MPXV能有效地感染人原代單核細(xì)胞。與牛痘病毒（CPV）不同，MPXV并非通過干擾MHC的表達(dá)或胞內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)，影響免疫應(yīng)答；而是通過抑制CD4+和CD8+ T細(xì)胞活化，消除局部T細(xì)胞反應(yīng)，避免全身免疫抑制及免疫監(jiān)測。

猴痘病毒基因組是一個線性雙鏈DNA分子（約為197 kb），末端包含一個由單鏈發(fā)夾環(huán)共價連接的反向重復(fù)序列（ITR），ITR包含一組短的串聯(lián)重復(fù)序列和多個ORF。MPXV基因組編碼管家功能的基因位于高度保守的中心區(qū)域，編碼毒力、宿主范圍的基因位于末端可變區(qū)域。MPXV對宿主細(xì)胞的DNA和RNA復(fù)制的依賴程度很低，可能與同屬病毒相似，在宿主細(xì)胞質(zhì)中復(fù)制形態(tài)獨(dú)特的胞內(nèi)成熟病毒（IMV）和胞外包膜病毒（EEV）。IMV具有堅固的物理結(jié)構(gòu)，便于在宿主之間傳播，而更脆弱的EEV被包膜包裹，限制宿主免疫清除，因此適合病毒在細(xì)胞間傳播。